植物GUS染色实验

植物GUS染色实验

GUS基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase，GUS），该酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为X-Gluc）水解，产生无色的吲哚氧基中间物，再经氧化二聚化作用形成不溶的深蓝色染料，使具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色。绝大多数植物细胞内不存在内源的GUS基因，GUS基因常作为转基因植物的报告基因，尤其广泛应用于研究外源基因瞬时表达转化实验。客户提供带GUS标签的转基因植株或者特定部位的植物组织样本，进行样本的整体染色后，即可清晰地观察到GUS基因在植物各个部位的定位分布及含量的差异。

实验目的：

植物GUS染色实验的主要目的是通过观察蓝色产物的生成，来确定转基因植物中GUS基因的表达部位和表达水平。由于绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性，因此GUS基因被广泛用作转基因植物的报告基因。

实验原理：

GUS（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解。在GUS染色实验中，该酶可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X-Gluc）分解为蓝色物质，从而显示出GUS基因的表达部位。

实验流程：

新鲜带土或者带培养基的整株植物活体运输或植物组织-20℃保存干冰冷冻运输—37℃恒温箱避光染色—75%酒精脱色—观察采图。

结果判读：GUS阳性蓝色，背景透明无色或浅黄色。

注意事项：

1、染色时间：染色时间过长可能导致背景染色，时间过短则染色不足，需根据组织类型和基因表达强度优化时间。

2、避光操作：X-Gluc对光敏感，染色过程中应避光。

3、脱色：脱色不充分可能导致背景过深，影响观察。

4、阴性对照：必须设置非转基因植物组织作为阴性对照，以确保染色特异性。 

仅供科研实验用，不做其他用途！