视网膜血管网铺片PAS染色实验检测

视网膜血管网铺片PAS染色实验检测

服务介绍：

视网膜血管网铺片PAS染色（Periodic Acid-Schiff Stain）是一种用于观察视网膜血管网络形态和结构的组织化学染色方法。PAS染色可以特异性地染色血管基底膜和糖原等碳水化合物成分，使血管网络清晰可见，常用于研究视网膜血管的发育、病理变化以及糖尿病视网膜病变等疾病。 

染色原理：

单独剥取眼球视网膜，用胰酶消化去除视网膜内细胞只保留血管网，将血管网均匀地铺在载玻片上进行PAS染色。PAS染色又称过碘酸雪夫染色。一般用来显示糖原和其它多糖物质。过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛，再与Schiff氏液的无色品红结合呈现紫红色，复染苏木素，细胞核呈蓝色。毛细血管基底膜含有大量糖类物质，经PAS染色后呈现紫红色，进而将血管网的形态结构染出来。 

实验步骤：

1、取材与固定：剥取眼球，使用4%多聚甲醛固定一段时间（如大鼠眼球固定12小时以上，整颗眼球4%PFA固定24小时以上）。

2、剥离与消化：剥离出视网膜，并使用胰酶等消化液去除视网膜内细胞，只保留血管网。

3、吹打与铺片：将消化后的视网膜血管网进行吹打，去除粘附在血管网上的细胞，直至血管网呈现透明状。然后，将透明的视网膜血管网铺展在载玻片上。

4、PAS染色：晾干的血管网铺片浸入自来水中5分钟。取出切片，稍甩干多余的水分，切片入0.5%高碘酸浸染15分钟，切片入纯水浸洗3次，每次10秒。稍甩干切片多余的水分，切片浸入已经提前恢复常温的雪弗溶液中于暗处浸染20分钟。取出切片，浸入装有自来水的塑料盆中流水冲洗5分钟，稍甩干切片多余的水分，入苏木素染液染色5分钟，自来水洗，盐酸水溶液分化2秒，自来水洗，氨水水溶液返蓝5秒，自来水洗。切片入无水乙醇3缸脱水，各5分钟，二甲苯透明5分钟，中性树胶封片。

5、观察与评估：染色完成后，通过显微镜观察视网膜血管网的形态结构，并进行评估。 

染色结果：

视网膜毛细血管经PAS染色后呈现紫红色（或红色），细胞核呈蓝色。闭锁毛细血管细胞核消失，且管腔萎缩变细呈细线状。 

仅供科研实验用，不做其他用途！