补体容血实验用 溶血素 SRBC抗体

溶血素5瓶起批
成分：兔抗绵羊红细胞溶血素 效价：1:4000
保存：4-8℃
（避光保存）
有效期：2年
用途：科研、教学实验使用，如总补体容血活性
（CH50）检测、补体结合实验
（cft）等
产品规格：1ml/支*5支/套
注意事项：请穿戴实验服及一次性手套操作 血清总补体容血活性
（CH50）测定方法 一、原理 利用绵羊细胞与相应抗体
（容血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和容血素量一定时，在规定反应的时间内，容血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%容血
（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。以引起50%容血所需的最小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。 本实验主要反映补体经典活化途径的容血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。 二、试剂及配制 1.缓冲生理盐水：
（1）贮存液： Na2HPO4.12H2O 2.85g KH2PO4 0.27g NaCl 17.00g 蒸馏水定容至100ml，4℃保存备用
（2）应用液：5ml贮存液加95ml蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1ml，当日配制，12小时内使用。 2.2%绵羊红细胞：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标 准化。 3.容血素：将绵羊红细胞容血素
（效价1:4000），用应用液做1:2000倍稀释
（即1ml容血素加1999ml应用液）。 4.待测血清：新鲜血液室温放置30min，再4℃放置60min，使血块收缩，4℃离心
（3000r/min）10min，取上清，-20℃保存。 三、操作步骤 试管法
（改良Mayer法） 1.致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素
（1:2000），混匀，置37℃水浴30min。 2.稀释血清：待测血清0.2ml，加应用液3.8ml，稀释度为1:20。 3.配制容血标准管：全容血管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀。50%溶血管:取全容血管液2ml加缓冲液2ml。 4.按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30min，第10管为非溶血对照： 补体CH50测定试管法 成 分 试 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1:20待测血清
（ml） 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 - 应用液
（ml) 1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15 1.10 1.05 1.00 1.50 致敏红细胞
（ml） 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 5.结果测定：取出试管，2000r/min离心10min，对照管应不溶血。肉眼比色，选与50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测
（波长542nm、0.5cm比色杯）OD值，确定与标准管最接近者为终点管，然后按下公式计算CH50值：血清补体CH50
（U/ml）=
（1/血清用量）×稀释度。 如第5管为终点管，测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。