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超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶测试盒的红细胞计数
发布时间:2023/12/8 9:11:23 已浏览次数: 23 次

 超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶测试盒的红细胞计数

(测红细胞)

一、测定意义:

ATP 酶存在于组织细胞及细胞器的膜上,是生物膜

上的一种蛋白酶,它在物质运送、能量转换以及信息传

递方面具有重要的作用,机体在缺氧及一些疾病状态下,

此酶活力发生一系列改变。

二、测定原理:

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷,测定无机磷的

量可判断 ATP 酶活力的高低。

三、试剂组成与配制:(试剂盒有效期 6 个月)

 

四、红细胞的前处理:

1、红细胞计数(见附录)或血红蛋白测定(试剂本所有售)。

2、红细胞溶血液的制备:

a、压积红细胞溶血液的制备取肝素抗凝全血,1000

/分,离心 10 分钟,弃上层血清,留下层压积红

细胞,取一定量的压积红细胞,加 49 倍的双蒸水,

例如取 5μL 的压积红细胞加入 245μL 双蒸水中,混

匀,使其充分溶血,对光观察直至溶液透亮。如果

预试结果太高,再将溶血液稀释成不同浓度再进行

预试后,再决定取样浓度。

b、全血红细胞溶血液的制备:取小鼠全血,轻轻摇匀,

取一定量的全血按照 1

24 的体积比加 24 倍双蒸水,

制成 25 倍稀释的溶血液,例如取 5μL 的全血加双蒸

120μL 充分混匀,制成 25 倍稀释的溶血液。对光

观察直至溶液透亮。如果预试结果太高,再将溶血

液稀释成不同浓度再进行预试后,再决定取样浓度。

[ 1]:制备好的溶血液尽快进行检测,否则易失活,

因而必须在所有的准备工作做好以后再配制

溶血液。

[ 2]:用不完的抗凝全血 4℃可保存 23 天, -20

以下保存一周或者更长时间。

[ 3]:不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂稀释样本。

[ 4]:预试结果将绝对吸光度值(测定管吸光度值

对照管吸光度值)控制在 0.2 左右为宜。

附录Ⅰ:红细胞计数法

红细胞计数有以下三种方法,只需取其中一种即可以。

1、计数板直接红细胞计数:

①、红细胞稀释液的配制:柠檬酸三钠 3.8 克,甲醛

1mL,双蒸水 100mL,混匀,4℃保存。

②、 1 支试管,加入红细胞稀释液 2mL,取抗凝全

10µl 加入试管稀释液中,反复吹吸数次,

再将试管颠倒数次混匀。

③、取一滴稀释血液灌入计数板。(应一次灌满,而且

不要灌得太多。)

④、用高倍镜计数左上、左下、右上、右下,中央 5

个中方格的红细胞数,将数得的数字×10 10

即为每升血中的红细胞数。

2、光电比浊法计红细胞数:

取试管 1 支,加入上述红细胞稀释液 4mL,再

20µl 抗凝全血,加入 4mL 稀释液中,反复吹吸数

次,再将试管颠倒数次混匀,立即倒入比色杯中,

540nm1cm 光径,双蒸水调零进行比色,记下

吸光度值。以计数板计数的红细胞的数值为横坐标,

以相应管的吸光度值为纵坐标,作标准曲线。您可

以不做曲线,用附录Ⅱ参考标准曲线图二(鼠红细

胞数与比浊法吸光度换算曲线)。根据标准曲线查出

红细胞数。

3、用血红蛋白(Hb)来换算红细胞数:

10µl 抗凝全血加入 2.5mL 血红蛋白测试液

(本所有供应)中,混匀,静置 10 分钟,于 540nm

1cm 光径,双蒸水调零进行比色。将测得的吸光度

乘以 367.7 即为血红蛋白的值。以计数板计数的红细

胞的数值为横坐标,以相应管的血红蛋白数为纵坐

标,作标准曲线。您可以不做曲线,用附录Ⅱ的参

考标准曲线图一(鼠红细胞数与血红蛋白数的换算

曲线)。根据标准曲线查出红细胞数。

 超微量 Ca +2Mg +2—ATP 酶测试盒的红细胞计数

 

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