超微量 Na +K + 、Ca 2+Mg 2+ 、总 ATP 酶测试盒的样本前处理
发布时间:2023/12/8 9:08:01 已浏览次数: 107 次

 超微量 Na +K + 、Ca 2+Mg 2+ 、总 ATP 酶测试盒的样本前处理

（测组织、培养细胞）

一、测定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，测定无机磷的量可

计算 ATP 酶活力的高低。

二、测定意义：

ATP 酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种

蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的

作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变，

另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。

三、试剂组成与配制：

四、样本的前处理：

1、组织的前处理：（组织匀浆上清液的制备参考实验方法学）

准确称取组织重量，按重量（g）：体积(mL)=1:9 的比

例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，

2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液（即 10%的匀浆上清

液），再用生理盐水 10 倍稀释成 1%，同时用考马斯亮蓝

试剂测定组织蛋白（试剂本所有售）。如果预试结果太高，

再将 1%的组织匀浆稀释成不同浓度再进行预试后再决定

取样浓度。

2、培养细胞的前处理：将培养细胞消化，离心，弃上清，留

下层细胞，每管加 0.2～0.3mL 生理盐水或匀浆介质制备成

10 7 /cm3细胞悬液，即 10 7 /mL，再进行破碎。破碎细胞的方

法有三种：①、用匀浆器匀浆。②、用超声粉碎器粉碎。

③、反复冻溶 3 次（第③种方法有时会影响酶活力）。制备

好的细胞悬液不需要离心，同时用考马斯亮兰试剂测定组

织蛋白（试剂本所有售）。再将细胞匀浆液稀释成不同浓度

进行预试，根据预试结果决定取样浓度。

[注 1]：在测试加样前要摇匀后取样。

[注 2]：不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂作为样本匀浆或

稀释样本。

[注 3]：预试结果将绝对吸光度值（测定管吸光度值—对照

管吸光度值）控制在 0.2 左右为宜。

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