免疫印迹WB实验的小技巧
发布时间:2023/6/9 14:37:33 已浏览次数: 269 次

 免疫印迹WB实验的小技巧

蛋白质免疫印迹法 (Western Blot ) ，简称WB ，是指通过SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白质分离开，然后将目标蛋白转移到载体(PVDF)膜上，利用抗原抗体的特异性结合，用特异性的一抗结合目标蛋白，用HRP标记的二抗结合一抗，再加以ECL发光液显色，检测组织或者细胞内某种或者某些特异性蛋白质的表达。蛋白质免疫印迹是做蛋白质分析的一种常规技术，常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析，还可以用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。　

蛋白提取是做WB的必要提取步骤。主要是将组织或细胞的蛋白分离提取出来，以便后续做WB检测。蛋白提取主要可以提取：总蛋白、胞浆/胞核蛋白、线粒体蛋白、膜蛋白。考马斯亮蓝染色 (coomassie blue staining) ，简称考染 ，是以考马斯亮蓝R250为染料，用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测

实验流程：

蛋白提取-制胶-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-化学发光-结果分析;

送样运输要求：

新鲜组织，100mg以上，干冰运输。

细胞量为5*10^6以上，收集细胞沉淀，干冰运输。