血清总补体溶血活性（CH50）测定方法
发布时间:2023/8/14 13:49:29 已浏览次数: 147 次

 血清总补体溶血活性（CH50）测定方法

一、原理
利用绵羊细胞与相应抗体（溶血素）结合成的复合物，可激活血清中的补体，导致红细胞溶解，当红细胞和溶血素量一定时，在规定反应的时间内，溶血程度与补体量及活性呈正相关。在接近50%溶血（CH50）时，二者之间近似直线关系，故以50%溶血作为最敏感的判断终点。以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50U，可计算出待测血清中总的补体溶血活性，以CH50U/ml表示。
 本实验主要反映补体经典活化途径的溶血功能，其结果与补体C1～C9各组成分的量及活性均有关。

二、试剂及配制
1.缓冲生理盐水：
（1）贮存液：
     Na2HPO4.12H2O        2.85g
     KH2PO4               0.27g  
     NaCl                17.00g
     蒸馏水定容至100ml，4℃保存备用
（2）应用液：5ml贮存液加95ml蒸馏水，再加10%硫酸镁0.1ml，当日配制，12小时内使用。
2.2%绵羊红细胞：无菌采取绵羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以缓冲液洗3次，并配成2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标                准化。
3.溶血素：将绵羊红细胞溶血素（效价1:4000），用应用液做1:2000倍稀释（即1ml溶血素加1999ml应用液）。
4.待测血清：新鲜血液室温放置30min，再4℃放置60min，使血块收缩，4℃离心（3000r/min）10min，取上清，-20℃保存。
三、操作步骤
试管法（改良Mayer法）
1.致敏羊红细胞：2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素（1:2000），混匀，置37℃水浴30min。
2.稀释血清：待测血清0.2ml，加应用液3.8ml，稀释度为1:20。
3.配制溶血标准管：全溶血管:2%绵羊红细胞2ml加8ml蒸馏水，混匀。50%溶血管:取全溶血管液2ml加缓冲液2ml。
4.按表所示，依次加各成分于试管中，混匀，置37℃水浴30min，第10管为非溶血对照：
补体CH50测定试管法

5.结果测定：取出试管，2000r/min离心10min，对照管应不溶血。肉眼比色，选与50%溶血标准管相近二管，再用分光光度计测（波长542nm、0.5cm比色杯）OD值，确定与标准管最接近者为终点管，然后按下公式计算CH50值：血清补体CH50（U/ml）=（1/血清用量）×稀释度。
如第5管为终点管，测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。