Polybrene /聚凝胺 使用操作说明
发布时间:2023/8/8 13:53:17 已浏览次数: 142 次

 Polybrene /聚凝胺 使用操作说明

产品名称：Polybrene (Hexadimethrine Bromide)

中文名称：聚凝胺

CAS号：28728-55-4

分子量：544.43

纯度：≥94%

浓度：10mg/ml

Polybrene(聚凝胺)是一类高价离子季铵盐多聚物.溶解后带正电.与细胞表面的阴离子结合,能显著提高逆转录病毒对细胞的感染效率。一般能是高感染效率2～10倍。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的哺乳动物细胞转染。但Polybrene对某些细胞也是存在毒性的,因此.使用之前要先对细胞进行测试。

聚凝胺又名Hexadime thrine Bromide .中文名海(地)美溴钹,是海(地)美溴铵( Hexadimethrine Bromide )液体制品的商标名.是种非常有效的基因转染增强剂。用于病毒介导细胞转染常用浓度为8μg/ml .具体浓度依细胞类型会有差异.可参阅文献或梯度实验摸索。Polybrene用于转染增强剂，已经成为全球各大实验室和各种基因转染服务机构最通用的方法之一 , 相比于硫酸鱼精蛋白( Protamine sulfate , CAS : 98001-69-5 )和其他阳离子的使用普遍率更高更广泛。

使用说明：

实验1:逆转录病毒感染( Retroviral Infection)

(1)重组逆转录病毒原液的制备:取5ml生长培养基(5%血清)加入约含单层转染逆转录包装细胞的100mm培养盘内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45um滤器过滤。

(2)待感染细胞的培养:100mm培养盘内加入10ml完全培养基，细胞密度为5x105/盘。

(3)病毒感染:细胞培养24h后，吸去完全培养液。用含polybrene的2m|病毒上清( 或将病毒原液稀释到2ml)感染细胞，polybrene的终浓度 为5 Hg-10 u g/ml。37℃孵育3-6h。

(4) 收集病毒颗粒:加入8ml完全培养基。感染3天后，按照1:5的比例用选择培养基裂解细胞。

实验2:转染

(1)完全生长培养基培养细胞培养细胞密度约50%;

(2)孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基Polybrene混合液，按如下操作制备混合液:①添加完全培养基(60mm培养M2ml，100mm培养皿3ml )

37℃预热;②添加10ng～10μg质粒轻轻混匀;③加入Polybrene至终浓度为5ug-10 H.g/mlo轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。

(3)去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基Polybrene溶液，在37° C孵育细胞620h。细胞培养的6h内约每1.5h轻柔混匀。

(4)去除DNA-培养基Polybrene溶液。用DMSO shock solution (15%DMSO in 1X HBSS )轻轻盖住细胞(60mm培养

(5)立即去除DMSOshocksolution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿每次用10ml培

养液清洗。皿3ml，100mm培养皿4ml)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得夜体均匀分布。然后37℃孵育细胞4min。

(6)加入完全培养基到细胞中;

(7)稳定转化:去除生长培养基，按照1 :5的比例用选择培养基裂解细胞。瞬时表达:去除生长培养基，加入新鲜的生长培养基。24-72h后收获细

注意事项：

1、为避免反复冻融，收到本产品或本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃保存。

2、因为Polybrene对某些细胞可能有一定的毒性，而且Polybrene长时间作用(大于12小时)也可能对某些细胞产生毒性，所以初次使用Polybrene处理细胞，建议先做毒性测试。

3、本产品可能对人体有一定的毒害作用，请注意适当防护，以避免直接接触人体或吸入体内。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅供科研实验用，不做其它用途！