链霉蛋白酶；蛋白酶E使用方法（仅供参考）
发布时间:2024/12/23 16:27:06 已浏览次数: 94 次

链霉蛋白酶；蛋白酶E

简介：链霉蛋白酶E（Pronase E）是一种从灰色链霉菌中提取的蛋白水解酶混合物。它有能力将蛋白质分解成单个氨基酸，使其适合广泛的蛋白质降解。链霉蛋白酶E至少包含细胞外丝氨酸蛋白酶在内的三种蛋白酶活性。通常情况，丝氨酸蛋白酶县广谱的底物特异性，通过分子上一个天冬氨酸，一个组氨酸，和一个丝氨酸组成的活性位点来调控。本酶选择性偏好水解谷氨酸或天冬氨酸羧基形成的肽键，常见的丝氨酸活性位点抑制剂可抑制其活性，如PMSF和DFP。链霉蛋白酶E还至少包含三种酪蛋白水解活性和一种氨基肽酶活性，这三种酪蛋白水解酶分别命名为灰色链霉菌来源蛋白酶A（Streptomyces griseus Protease A），蛋白酶B（Steptomyces gtniseus ProteaseB）和胰酶（Streptomyces gfiseus Typsin）。

别名：Pronase E；链丝菌蛋白酶E

物理性状及指标：

外观：……………………白色至微褐色粉末

溶解性：…………………DMSO：50 mg/mL；Water：10 mg/mL

酶活力：…………………＞7000U/g

【酶活力定义：1g固体酶粉（或1ml液体酶），在30℃±0.2℃、pH7.5条件下，1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸，即为1个酶活力单位，以U/g（u/mL）表示。】

储存条件：-20℃，避光防潮密闭干燥

运输条件：湿冰运输（按季节）

产品用途: 科研试剂，严禁用于人体。

链霉蛋白酶E的应用广泛，可应用于蛋白的大量或者完全降解、蛋白酶抑制剂的研究、热失活动力学、核酸分离、与胶原酶和胰蛋白酶联合组织消化、以及用于糖肽生产的糖蛋白纯化等。

消化蛋白：（仅供参考）

1、储存液制备：溶解于去离子水，配制成5-20mg/mL的Pronase E储存液，若用于DNA或RNA分离步骤，建议将溶液56℃加热处理15min，之后37℃孵育1h，此步骤能促使酶发生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后将储存液分成单次用量，-20℃冻存，通常情况1年稳定。

2、DNA分离：直接加入DNA制备体系（含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型Pronase E工作浓度范围250-500μg/mL，于37℃孵育1-4h。【注意：建议工作浓度范围在250-2000μg/mL，依照具体情况而定】

3、蛋白水解：溶解约0.2μM蛋白到0.2mL 50mM碳酸氢铵缓冲液，pH8.0（或磷酸盐缓冲液，pH7.0），之后按照1%（w/w）加入Pronase E，于37℃孵育24h。根据情况，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。