TEV蛋白酶的应用
发布时间:2024/7/1 14:41:33 已浏览次数: 185 次

TEV蛋白酶的应用

rTEV 蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶，该酶特异性识Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly 七氨基酸序列。rTEV 蛋白酶与肠激酶 U(EK)、Thrombin、FactorXa、SUMO 等蛋白酶相比，具有高活性、高特异性的双重特点，rTEV 蛋白酶因具高剪切活性和特异性，已成为融合蛋白表达后去除融合 tag 的首选蛋白酶。该酶经 6×His 标签纯化而得(含组胺酸标签)，纯度达99％， 剪切反应完毕后可通过His标签纯化树脂Ni-NTA Resin(Cat.No. P2010)去除，以达到纯化目的蛋白的目的。

影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；2）Zn离子（＞5 mM）对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。

表达方式: A DNA sequence encoding the TEV Protease （NP_062908） （Gly 2038- Gly 2280） was fused with polyhistidine tag at the N-terminus, with a Ser 2256 Asn mutation

种属:Human

表达宿主: E.Coli

QC Testing

纯度:> 95%, as determined by SDS-PAGE

内毒素:< ﹤1.0 EU per 1μg cytokine as determined by the LAL method.

稳定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt -70°C

预测N端: Met 1

分子量:The recombinant human TEV protease consists of 251 amino acids and has a predicted molecular mass of 28.6 kDa. As estimated in SDS-PAGE under reducing conditions.

缓冲液: Supplied as a 0.2μm filtered solution of 50mM Tris, 10%Sucrose,5mM DTT pH8.0

SDS-PAGE:

Usage Guide

储存方法:Store it under sterile conditions at -70℃. It is recommended that the protein be aliquoted for optimal storage and usage. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

特性：

特异性：TEV蛋白酶具有高度特异性，能够选择性地剪切含有特定识别序列（如Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser7）的多肽链，而不会引起非特异性剪切或其他与剪切位点无关的酶活性。

催化效率：TEV蛋白酶的催化效率很高，能够在短时间内实现蛋白酶解反应。

稳定性：TEV蛋白酶具有较好的耐热性和耐酸碱性，可以在不同的反应条件下工作。

活性：TEV蛋白酶在低温下也具有活性，并且其突变体具有自溶耐受性。

应用：

重组蛋白表达系统：TEV蛋白酶常用于从融合蛋白中去除亲和纯化标签，如GST、His等，从而得到纯化的目标蛋白。

结构生物学研究：在结构生物学研究中，TEV蛋白酶可用于切割目标蛋白分子中特定的位点，以便于分子结构的研究。

蛋白酶解研究：TEV蛋白酶还可用于研究蛋白质酶解过程中的底物选择性、酶解位点、速率等相关问题。